外泌体研究持续升温，几乎所有研究者都面临这样一个问题：如何获得足够多的高纯度外泌体。外泌体的提取方法有很多，但提取的外泌体含量、纯度等各有优缺点，我们先来了解下几种常用的外泌体分离方法。

1、差速离心法

差速离心法是根据不同蛋白质分子及囊泡、细胞及细胞碎片等在均匀悬液中沉降速度的差异，通过逐渐增加离心力或离心时间，分离沉淀或上清的方法来提取。

1）低速离心去除细胞和凋亡碎片，

2）更高速离心以消除更大的囊泡，

3）超高速离心沉淀外泌体，然后用0.22μｍ的滤膜去除凋亡小体、微泡等进一步纯化。 差速离心法操作简单，适合大体积样本中外泌体的分离、提取，不适用于微量及珍贵样本的研究。

2、密度梯度离心法

目前应用较多的是蔗糖密度梯度离心法，将细胞混合悬液或匀浆置于蔗糖介质的顶部，通过离心力的作用使细胞分层、分离，将外泌体从混杂物质中分离出来，然后使用滤膜进一步纯化。 蔗糖密度梯度离心法获取的外泌体纯度高，已作为药物载体用于临床试验。但前期准备工作繁琐，操作复杂耗时长。

3、qEV尺寸排阻法

qEV是采用尺寸排阻SEC原理按照分子粒径进行分段分离的方法。将生物样品流经具有固定孔隙的SEC填充物，吸附粒径较小的分子如蛋白、脂类等，而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙。在缓冲液的作用下，较大粒径的囊泡（外泌体）流速快，在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管，成为实验样品。而小分子具有较长的保留时间，最后被洗脱出来。

qEV技术有效避免了超速离心和密度梯度离心等传统方法分离囊泡（外泌体）时，由于超高离心力与蔗糖溶液高粘性造成的HDL蛋白或囊泡的聚集污染，也避免了传统方法对于囊泡（外泌体）的膜结构的损伤，使其保留完整的生物活性；不过，该方法耗时较长，不适合大量样本处理。

4、基于聚合物的沉淀技术

基于聚合物的沉淀技术通常包括将样本与含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃温育并低速离心。用于聚合物沉淀的最常见聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用这种聚合物沉淀具有许多优点，包括对分离的外泌体影响小、pH中性等。目前大多数快速分离外泌体的商品化试剂盒都是基于此方法。 然而基于聚合物的沉淀方法可能会同时分离非囊泡污染物（包括脂蛋白）外泌体纯度不高。